溶藻弧菌外膜蛋白ompk基因表达和间接elisa检测方法的初步建立

溶藻弧菌是中国南部水产养殖业中弧菌病的最主要病原菌,数量居海洋类弧菌之首,其快速检测具有重要意义。以溶藻弧菌国内标准株atcc17749基因组dna为模板,pcr扩增出外膜蛋白ompk基因,将其克隆入表达载体pet-28a中,获得重组质粒pet-28a-ompk,限制性内切酶结合琼脂糖凝胶电泳分析和序列测定结果表明,该序列开放读码框正确且与已发表的ompk结构编码序列完全一致。将重组质粒pet-28a-ompk转化大肠杆菌bl21plyse,高效表达重组蛋白,将其纯化后免疫小鼠所得的高免血清能外膜蛋白ompk特异性结合,表明体外表达的重组蛋白ompk具有良好的免疫原性和反应原性。利用该抗溶藻弧菌外膜蛋白ompk的抗血清建立了间接elisa检测方法,检测灵敏度为104cfu/ml,能特异性检测出溶藻弧菌,与其他菌株无交叉反应。