草鱼出血病病毒vp6蛋白的原核表达、纯化及免疫效果

为了探讨草鱼出血病病毒(gcrv)vp6亚单位疫苗对草鱼出血病的免疫保护作用,将vp6基因克隆进原核表达载体pet-28a(+),构建了重组质粒pet28a(+)-vp6。sds-page和western-blotting显示,重组vp6蛋白的分子量约为43ku,主要以包涵体形式存在,重组蛋白占菌体总蛋白的20%左右;ni2+柱纯化后的重组蛋白,以每尾500μg肌肉注射免疫草鱼(14～20cm,60～120g),并在第14、21、28、49、70天通过间接凝集反应检测抗体水平,结果显示,免疫注射后第14天可检测到鱼体产生的特异性抗体,第21天达到最高峰,第70天仍可检测到抗体的存在;免疫注射第21天人工接种gcrv,免疫后的草鱼对出血病的保护力达100%。