尼罗罗非鱼微阵列fosmid基因组文库的构建及基因筛选

以pcc2fos为载体构建尼罗罗非鱼fosmid基因组文库,共挑选115200个单菌落,保存在300块384孔样品板中,构建4800个行池、7200个列池、300个板池和25个超级池,形成微阵列,并对其进行复制备份。该文库插入片段平均长度约为40kb,覆盖约罗非鱼基因组的3倍。连续传代实验研究表明,文库具有良好的稳定性。由于构建超级池－板池－行、列池三级池系统形成的微阵列,有助于快速、准确、有效地筛选目的基因,仅需77个pcr反应(超级池25板池12行池16列池24)就能筛选到含有目的基因的一个单克隆,解决了普遍存在的文库筛选难题。通过文库尝试筛选18个与性别分化和生长相关基因,均获得2~5个阳性克隆,说明文库具有较好的实用性。