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ISSN: 2333-9721
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水产学报  2013 

草鱼呼肠孤病毒hz08株vp4蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

DOI: DOI:10.3724/SP.J.1231.2013.38410, PP. 450-456

Keywords: 草鱼呼肠孤病毒,vp4蛋白,单克隆抗体

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Abstract:

为了建立针对草鱼呼肠孤病毒(gcrv)流行株的血清学检测方法,本研究构建了能高效表达gcrvhz08株主要衣壳蛋白vp4的重组表达载体pet32a-s6,利用纯化的vp4重组蛋白免疫balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与sp2/0细胞融合,经过克隆和筛选,获得3株能稳定分泌抗vp4重组蛋白单克隆抗体(monoclonalantibody,mcab)的杂交瘤细胞,分别命名为2c2、2f3和5e5。抗体经亚型鉴定均为igg1,轻链为kappa链;间接elisa试验证明,三株杂交瘤细胞分泌的mcab可特异性识别gcrv-hz08,与gsrv,isknv,ihnv均无交叉反应。选择2c2作为腹水生产细胞株,免疫小鼠后腹水elisa效价为1:720000;ifa和westernblot结果显示,这株杂交瘤细胞分泌的mcab能够特异性识别gcrv-hz08病毒粒子。本研究制备的mcab具有良好的生物学特性,为gcrv流行株检测方法的建立及vp4蛋白相关功能研究奠定了基础。

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