草鱼呼肠孤病毒衣壳蛋白靶向灭活转基因p0的构建

为探索草鱼出血病防治新技术,实验采用衣壳蛋白靶向灭活(capsid-targetedviralinactivation,ctvi)策略,利用tgf2转座子元件,构建了带爪蟾ef1α或鲤热休克蛋白70两种不同启动子的ctvi转基因质粒ptgf2-ef1α-vp3-sn或ptgf2-hsp70-vp3-sn。该2种质粒均包含gcrv衣壳蛋白vp3与金黄色葡萄球菌核酸酶(staphylococcusaureusnuclease,sn)融合表达阅读框。通过将2种ctvi转基因质粒与体外合成的tgf2转座酶5'加帽mrna共同显微注射入草鱼1~2细胞期受精卵,获得了带2种不同启动子的ctvi转基因草鱼群体。pcr和测序结果显示,2种转基因阳性草鱼基因组中均含有外源gcrv衣壳蛋白vp3与sn基因片段,阳性率分别为40.2%和37.0%,表明tgf2转座子已成功介导ctvi融合表达基因整合到草鱼基因组中。本实验共获得了120尾p0ctvi转基因个体,为将来构建抗出血病草鱼新品系奠定了基础材料。