三角帆蚌钙网蛋白基因cdna的分子特征与表达分析

为研究淡水珍珠形成相关基因及调控机理,以三角帆蚌为研究对象,借助cdna末端快速扩增(race)技术获得了三角帆蚌的钙网蛋白基因(calreticulin,hccrt)cdna序列,该序列长1437bp,包含231bp的5′非编码区(untranslatedregion,utr)和615bp3′utr以及591bp的开放阅读框(orf),共编码196个氨基酸残基,包含一段由21个氨基酸组成的信号肽和一段由175个氨基酸的成熟肽,分子量约为22.4ku,理论等电点5.01。氨基酸序列分析表明,该序列不存在跨膜结构,疏水性分析显示该蛋白整体为亲水性蛋白。氨基酸列比对分析显示,hccrt具有保守的钙网蛋白家族结构,具有2个保守的钙网蛋白家族标签序列:kheqnidcgggylkvf和imfgpdicg,与其他已知物种的crt具有较高保守性,其中与斑马鱼的相似度为77%,与长牡蛎和马氏珠母贝的相似度为70%。对三角帆蚌hccrt蛋白序列的二级结构和三级结构进行预测分析,显示该蛋白同时含螺旋和折叠。实时荧光定量pcr分析结果显示,hccrt在外套膜、血液、鳃、斧足、肝脏、肾脏、肠和闭壳肌等8个组织中均有表达,其中在外套膜中表达量最高,血液次之,在其他组织的表达量极少。初步推测hccrt参与了三角帆蚌珍珠形成的生物矿化过程。