文蛤内脏产气荚膜梭菌毒素基因的pcr检测

用细菌学方法分离并初步鉴定文蛤内脏中的产气荚膜梭菌，pcr方法检测分离菌株的α、β、ε、ι、β2和肠毒素等产气荚膜梭菌毒素基因,pcr扩增片段克隆后进行核苷酸序列测定，然后与genbank相应毒素基因的核苷酸序列进行同源性比较；分离菌株α毒素全长基因克隆、测序后与不同来源分离株进行同源性比较；检测内脏产气荚膜梭菌阳性的蛤肉组织中的α毒素基因以判定食品安全性。结果表明，文蛤内脏产气荚膜梭菌分离率为71％，69％的分离菌株为c型，31％的为a型，两种毒素型均能扩增出特异性β2条带及肠毒素条带，检出基因与genbank相应毒素基因的同源性在98％以上；蛤肉组织α毒素基因检测结果为阴性。文蛤内脏分离菌株α毒素全长基因与不同来源分离株的同源性为98.64％～99.58％。本研究首次在文蛤内脏检出产气荚膜梭菌的毒素基因，对水产动物产气荚膜梭菌的进一步研究及人类的食品安全有一定的指导意义。