环丙沙星单克隆抗体的制备及鉴定

通过改进的碳二亚胺法制备环丙沙星- 牛血清白蛋白偶联物(CIP-BSA)，用紫外扫描、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法鉴定偶联物。利用制备的CIP-BSA 偶联物作为免疫原，免疫Balb/c 小鼠，用杂交瘤技术制备环丙沙星单克隆抗体，并对其效价、亲和力和特异性进行鉴定。结果表明：CIP-BSA 的偶联比为30:1。经间接酶联免疫吸附(ELISA)法筛选，共筛出两株敏感、特异的杂交瘤细胞(JY-1、JY-2)。这两株细胞的腹水经纯化后的抗体效价分别为5.12 × 106、2.56 × 106，亲和力常数分别为2.88 × 109、2.46 × 109L/mol，两抗体均为IgG1a，取亲和力高的JY-1 进行竞争抑制测定，IC50 值可以达到9.83ng/mL。该单抗仅与恩诺沙星存在交叉反应，交叉反应率为95%。通过验证得到的JY-1 细胞株分泌的单克隆抗体可用于水产品中环丙沙星残留的快速检测