黑曲霉酸性α-淀粉酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

？以黑曲霉aspergillusniger基因组dna为模板，pcr扩增出酸性α-淀粉酶的结构基因，将此基因插入载体ppic9k，重组质粒ppic9k-asaa转化毕赤酵母smd1168，并通过g418平板培养基筛选高拷贝转化子。在酵母α-factor及aox1基因启动子和终止信号的调控下，酸性α-淀粉酶大量表达并分泌到胞外，该酶的表达受甲醇的严格调控和诱导，摇瓶培养中，2%甲醇诱导培养168h后酶活力达到最大值2838u/ml。sds-page结果显示该重组酶的分子质量为58kd。该酶的最适反应ph值为4.0，在ph3.0～6.0之间酶活力基本保持稳定，最适反应温度为70℃，在工业生产常用温度50℃条件下，该酶能够长时间保持稳定，并具有较高的酶活力。重组毕赤酵母遗传稳定性良好。