重组酶FLP在弱氧化葡糖杆菌中的表达及应用

本实验借助宽宿主载体pBBR1MCS-5，构建在弱氧化葡糖杆菌（Gluconobacter suboxydans）中表达FLP重组酶的表达载体，转化弱氧化葡糖杆菌，获得阳性转化子；采用两步法RT-PCR（reverse transcription-polymerasechain reaction）验证，结果表明：flp基因在宿主细胞中转录表达；将pBBR1MCS-psldh-flp重组质粒转化至带有四环抗性的突变菌株JGDH－，PCR验证表明带有FTR位点的抗性标记得到有效删除。重组酶FLP在Gluconobactersuboxydans的表达提供了一种循环使用选择标记基因进行多个位点基因敲除或置换的方法