貂肠炎病毒sybrgreeni荧光定量pcr检测方法的建立

？根据genbank登录的水貂肠炎病毒（ｍｅｖ）ｖｐ２蛋白基因的保守序列设计了１对特异性引物，经ｐｃｒ扩增出１４６ｂｐ的目的片段，并克隆到ｐｍｄ１８－ｔ载体上，提取重组质粒经ｐｃｒ及测序鉴定正确后，以１０倍梯度稀释质粒作为阳性标准品，绘制荧光定量标准曲线，以此建立一种基于ｓｙｂｒ？green荧光染料的定量ｐｃｒ特异性检测水貂肠炎病毒的方法。结果表明：该方法对ｍｅｖ有很好的特异性，检测灵敏度为３４拷贝／μｌ，且重复性试验变异系数均小于２％。临床检测中，在８０份样品中检测到３０份阳性样品，高于普通ｐｃｒ和电镜观察方法的检出率。该方法的建立实现了对ｍｅｖ临床早期快速诊断和定量分析，为毛皮动物ｍｅｖ的防控提供了可靠的检测方法。