利用dsn和smarttm技术构建绿僵菌产孢时期均一化全长cdna文库

？dsn（duplexspecificnuclease）是最近发现的一种热稳定核酸酶，该酶能够降解双链dna和dna-rna的杂交体中的dna而对单链核酸分子几乎没有作用。基于dsn的核酸均一化技术是一项操作简单，均一化效果好的新技术。为高效获得与绿僵菌产孢相关的全长cdna，采用dsn均一化技术与smarttm(switchingmechanismat5′endofrnatranscript)建库技术相结合的方法，构建了杀虫真菌绿僵菌菌株cqma102产孢时期的均一化全长cdna文库。经检测，原始文库滴度为2.1×106cfu/ml，库容量超过6×106。随机挑取100个克隆，pcr方法测得文库重组率大于95％,插入片断平均长度1500bp。小规模测序分析表明，全长基因的比例超过60％。对组成性表达基因3-磷酸甘油醛脱氢酶g3pdh和微管蛋白β-tubulin均一化前后丰度检测表明，其丰度均有大幅度的下降。