拟南芥alpha-dioxygenase2原核表达，纯化及亚细胞定位预测

？alpha-dioxygenase2推测可以催化脂肪酸alpha氧化，参与植物的发育过程。从abrc（arabidopsisbiologicalresearchcenter）获得alpha-dioxygenase2基因cdna，用带有smai和xhoi酶切位点的引物扩增编码区，连入pmd-tsimplevector,测序无误后，双酶切将dox2构建于原核表达载体pgex-5x-1中，转化表达菌株bl21(de3)plyss和bl21(de3)-riplcodon+,sds-page和westernblot结果表明该基因在bl21(de3)-riplcodon+表达菌株中得到了高效表达，可溶性分析表明大部分目的蛋白以包涵体形式存在，通过gst亲和柱纯化得到可溶性目的蛋白，供下一步活性分析之用。生物信息学分析表明：该基因读码框密码子中88个为e.coli的稀有密码子，占总密码子的14%。支持向量机算法对dox2进行的亚细胞定位预测分析提示：该酶可能定位在细胞质中。