无核葡萄vvwrky20基因的克隆及其在胚珠败育过程中的差异表达分析

？wrky转录因子是植物特有的一类超家族转录因子，在植物的生长、发育和衰老过程中都有wrky转录因子的参与。本研究利用srap-cdna技术，以无核葡萄(vitisvinifera)品种无核白胚珠各发育时期的cdna为材料，克隆获得了311bp的差异表达片段，进一步在有核葡萄(v.vinifera)品种黑比诺胚珠中进行验证。blastn分析表明，差异表达片段为葡萄基因组预测的wrky20基因序列(xm_002272334.2)的部分序列。以序列xm_002272334.2为模版设计引物，通过rt-pcr技术在无核白胚珠cdna中克隆到一个长1796bp的同源序列，其orf为1653bp，编码550个氨基酸，命名为vvwrky20(genbank登录号：jq782602)。生物信息学分析表明，vvwrky20含两个wrky保守结构域，两个c2h2锌指结构域，两个dna结合位点，为wrky家族中的ⅰ类成员。其分子量为60140.4d，等电点为6.10，不稳定系数为51.01，属于不稳定蛋白。实时荧光定量pcr分析，该基因在无核白胚珠发育过程中表达量大且变化十分很明显，最大值与最小值之比为17.56，在有核品种黑比诺中，表达较低且表达水平保持相对稳定，最大值与最小值之比仅为2.52。在同一发育时期，该基因在无核白中的表达量也远高于在黑比诺葡萄中的表达量，10d时为15.77倍，30d时达到229.12倍。有核与无核品种vvwrky20基因表达的差异表明，该基因可能参与无核葡萄胚珠败育。研究结果为进一步研究葡萄胚珠败育机制提供基础资料。