乌珠穆沁羊成肌细胞的诱导分化及相关基因表达

？成肌细胞(myoblastcell)是指胞浆中含有肌丝的肌组织前体细胞，具有自我更新和促进肌纤维再生的能力，是体外研究肌肉发育调控机理的理想载体。本研究采取成年乌珠穆沁羊(ovisaries)的背最长肌组织，结合使用胶原酶消化和差速贴壁两种方法分离纯化羊成肌细胞，并应用cck-8法检测细胞生长曲线，苏木素-伊红染色与定量pcr检测成肌分化效果。结果显示，分离的细胞接种到培养瓶中24h后，高折光性亮圆形细胞开始贴壁，少量细胞有小突起。培养48h后,出现大量长梭形细胞，部分细胞伸出突起呈星型，细胞胞浆丰富。细胞生长曲线显示，成肌细胞符合正常生长规律，细胞传至第三代后用于cck-8试剂盒检测，经分析后发现细胞符合正常生长规律，生长曲线近似s形，3d后开始进入对数生长期，第3~8天增殖迅速，第8天后细胞增殖速度减缓，第9天基本进入平台期。成肌诱导5d后，大量成肌细胞开始从单个核期进入合体细胞阶段，融合成核位于中央的多核性长竹状初生肌管。随后逐渐规律性地沿一个方向平行排列，形成多核的肌管。定量pcr结果显示，mstn(myostatin)、fst(follistatin)、btg2(b-celltranslocationgene2)与btg3(b-celltranslocationgene3)在成肌细胞分化过程中有不同程度表达，存在阶段特异性。mstn与fst随分化时间推移表达量逐渐降低，但fst基因表达量显著高于mstn基因(p<0.05)；分化期成肌细胞的btg3表达极显著高于未分化期(p<0.01)，而btg2的表达则显著低于细胞未分化状态(p<0.05)。研究结果提示，本研究分离的羊成肌细胞具有肌源性，可分化为肌管；btg2与btg3两基因呈相反趋势表达，可能说明基因在肌肉发育过程中起不同作用。