牛支原体的环介导等温扩增快速检测技术研究

？牛支原体(mycoplasmabovis)是感染牛的一种重要的致病性病原体。本研究利用环介导等温扩增(loop-mediatedisothermalamplification,lamp)技术建立了牛支原体的快速检测方法。该方法以牛支原体保守性基因uvrc为靶序列设计了5条特异引物，在58℃等温条件下，60min即可完成反应。lamp方法能检测出20pg牛支原体dna，较pcr方法高100倍，用牛鼻支原体(m.bovirhinis)、无乳支原体(m.agalactiae)、精氨酸支原体(m.ariginini)、牛副流感病毒(bpiv)、牛腺病毒(badv)、牛传染性鼻气管炎病毒(ibrv)作特异性检测，两种方法均有很高的特异性。本研究还将荧光显色剂钙黄绿素(calcein)和mn2+用于lamp反应结果的可视化检测。临床鼻拭子样品煮沸后，可直接进行等温扩增，省去了dna提取步骤。在对167个临床鼻拭子样本的检测中，lamp方法检测结果阳性率(26.95%)高于pcr方法检测出阳性率(19.16%)，这证明本研究所建立的方法，与pcr法比较更适于临床样品的检测。研究结果表明，lamp方法具有操作简便、快速、高效、敏感、特异、经济等特点，适于基层实验室监测的广泛使用。