人羊膜间充质干细胞(hamscs)的分离、体外培养及诱导分化

？人羊膜间充质干细胞(humanamnioticmesenchymalstemcells,hamscs)属于成体干细胞，具有来源广、低免疫原性、增殖快等特点。本研究旨在建立hamscs的体外分离培养方法，探索其向三胚层分化潜能。无菌条件机械分离人羊膜并剪碎，经过两次胰蛋白酶消化去除上皮细胞后，再用ⅰ型胶原酶消化分离得到hamscs。观察细胞形态，生长规律，染色体分裂中期相；通过二氨基联苯胺(diaminobenzidinestaining,dab)染色、免疫荧光、流式细胞仪、定向诱导三胚层分化和rt-pcr检测等方法进行鉴定。结果表明，从人羊膜中分离得到纯度较高的间充质干细胞，经过免疫组化波形丝蛋白(vimentin)dab染色呈阳性；免疫荧光检测表面标记vimentin和阶段特异表达抗原4(stagespecificembryonicantigens,ssea-4)均呈阳性；hamscs表达cd29、cd49d和cd73表面抗原，不表达cd34、cd45和hla-dr；rt-pcr检测干细胞特异基因pou5f1转录因子4(octamer-bindingtranscriptionfactor-4,oct4)、性别决定基因相关转录因子2(sry-relatedhigh-monility-group(hmg)-boxprotein-2,sox2)和nanog均在mrna水平上表达；经过免疫组化和rt-pcr检测在体外特定条件下可成功诱导分化为成脂、成骨、神经和胰岛样细胞。结果表明，hamscs可在体外分离培养并保持稳定的遗传学特性，不仅具有间充质干细胞特性，还具有向三胚层分化潜能。本研究为组织工程和再生医学的临床应用提供实验基础。