牛白介素32基因可变剪接体(il-32γ)的分子克隆及功能验证

？牛白细胞介素32(interleukin-32,il-32)基因是近年发现的一种新型功能基因，是一种炎症性细胞因子，其主要作用是诱导其他细胞因子和化学因子的产生，并在自身免疫性炎症性疾病中发挥重要作用，可促进细胞凋亡，从而抑制结核分支杆菌(mycobacterium)等多种分支杆菌感染，提高动物机体抗病能力。本研究从秦川牛(bostaurus)脾脏组织中分子克隆了牛il-32β基因及其可变剪接体il-32γ基因，经序列分析表明，该基因定位于牛25号染色体上，实验克隆的牛il-32β基因与ncbi中已发表序列有5个碱基不同，通过蛋白二级序列比较，该差异并不影响蛋白的折叠，推测这几个碱基差异是秦川黄牛il32基因的snp。il-32γ比il-32β序列多了第二内含子，导致编码序列多编码47个氨基酸。为了研究该可变剪接体的功能，本研究构建了真核表达载体pires-il32γ-gfp。将该载体稳定转染小鼠(musmusculus)巨噬细胞raw264.7，获得超表达牛il-32γ基因的小鼠巨噬细胞，同时以稳定转染人il-32γ基因的小鼠巨噬细胞为阳性对照，real-timepcr检测表明，超表达牛il-32γ具有调节il-1β、il-6、mip2、tnfα等细胞因子的功能，其趋势与阳性对照人il-32γ的趋势相近。本实验研究为进一步研究牛il-32γ基因生物学功能打下了基础。