5-氮杂胞苷和曲古抑菌素a对转基因绒山羊外源dsred基因表达效率的影响

？基因沉默现象普遍存在于转基因动植物上，为转基因生物的培育和应用带来了新的难题。本实验对2只健康转基因克隆绒山羊(caprahircus)上分离的耳尖成纤维细胞、表皮细胞和转基因核供体细胞进行分析，观察外源基因海葵红色荧光蛋白(redfluorescenceproteinfromdiscosomasp.,dsred)表达情况。发现在转基因绒山羊上耳尖成纤维细胞的外源基因的表达量显著高于表皮来源细胞的外源基因表达量(p＜0.05)。对2只成体转基因绒山羊(耳号为zk0311-1和zk110324-1)耳尖成纤维细胞的cmv启动子进行重亚硫酸盐测序后发现其处于很高的甲基化状态zk0310-1：89.09%，zk110324-1：86.36%。经过5氮杂胞苷(5-azacytidine,5-az)处理的转基因白绒山羊细胞的dsredmrna表达量均有明显的升高(p＜0.05)，在0~1μmol/l曲古抑菌素a(trichostatin,tsa)浓度的范围内各种细胞的dsredmrna表达量与tsa浓度呈剂量依赖关系(r2=0.985,p＜0.01)，针对来源于两只转基因绒山羊的两种细胞的最适药物处理浓度分别为：zk0311-1成纤维细胞，5-az：5μmol/l、tsa：1.0μmol/l；zk0311-1表皮细胞，5-az：20μmol/l、tsa：1.0μmol/l；zk110324-1成纤维细胞，5-az：10μmol/l、tsa：1.0μmol/l；zk110324-1表皮细胞5-az：5μmol/l、tsa：0.75μmol/l，5-az的处理时间为7d，tsa的处理时间为24h。经5-az和tsa处理细胞系的红色荧光蛋白表达量与其mrna的表达量发生同步的提高(p＜0.05)。另外经5-az最适浓度处理后，2只转基因绒山羊耳尖成纤维细胞的cmv启动子的甲基化水平也有显著下降zk0310-1：78.48%，zk110324-1：49.7%(p＜0.05)，证明了5-az具有明显抑制外源基因启动子甲基化水平的作用。研究结果表明，在成体来源的转基因细胞上，tsa和5-az处理是提高外源基因表达效率的有效措施。本研究对如何改善转基因动物生产中发生的外源基因沉默的问题具有重要的参考价值。