鸭梨几丁质酶ⅲ基因(pbchiⅲ)的克隆及原核表达

？几丁质酶(chitinase,chi)可以降解病原物真菌细胞壁组分，是一类重要的病程相关蛋白，水杨酸(salicylicacid,sa)、乙烯、植物病原真菌、细菌、病毒等均可诱导其产生。为探究鸭梨(pyrusbretschneideriyali)chi基因的作用，本研究从鸭梨中克隆了几丁质酶ⅲ(chitinaseⅲ,chiⅲ)基因的cds序列，命名为pbchiⅲ(genbank登录号:kj872675)，全长897bp。系统进化分析表明，该基因与黄冠梨(pyrushuangguan)chiⅲ基因(acm45715.1)的氨基酸同源性最高，其核苷酸序列与黄冠梨(fj589785.1)的亲缘关系最近。实时定量pcr(quantitativereal-timepcr,qrt-pcr)分析显示，pbchiⅲ基因在鸭梨的根和果实中表达量较大，极显著高于茎和叶中的表达量(p＜0.01)；pbchiⅲ的表达受sa的调控，在供试的96h内，sa可诱导该基因表达，且表达量在12h达到最高，与同期对照相比差异极显著(p＜0.01)。利用原核表达系统成功表达了pbchiⅲ蛋白，在大约31kd处成功诱导出一条特异蛋白条带。本研究首次克隆了鸭梨pbchiⅲ基因的cds序列，研究了其在鸭梨不同组织器官中的表达量及在sa诱导下的表达特性，为进一步探索pbchiⅲcds序列的功能提供了基础资料。