胰岛素样生长因子-1(igf-1)对牦牛卵丘细胞热休克蛋白70(hsp70)表达的影响及其与细胞凋亡的关联性分析

？为研究胰岛素样生长因子(insulin-likegrowthfactor,igf-1)是否通过调控热休克蛋白70(heatshockprotein70,hsp70)抑制牦牛(bosgrunniens)卵丘细胞凋亡，本研究在牦牛卵丘细胞体外培养时分别加入0、50、100和200ng/mligf-1，运用实时荧光定量pcr(quantitativereal-timepcr,qrt-pcr)、蛋白免疫印迹(westernblot,wb)和免疫荧光技术从基因和蛋白水平检测hsp70的表达；qrt-pcr分析igf-1对凋亡相关基因b-细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因(b-celllymphoma/leukemia-2,bcl-2)和b细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x(b-celllymphoma/leukemiaassociatedxprotein,bax)的调节作用，流式细胞技术统计不同处理组卵丘细胞凋亡率。结果显示，(1)igf-1浓度为100ng/ml时，卵丘细胞的hsp70mrna和蛋白相对表达量最高，显著高于igf-1浓度为50和200ng/ml组(p＜0.05)，对照组hsp70mrna的相对表达量最低(p＜0.05)，卵丘细胞的细胞质和细胞核均可表达hsp70蛋白；(2)加入igf-1，baxmrna相对表达量显著下降(p＜0.05)，100ng/ml时最低，bcl-2mrna相对表达量显著增加，100ng/ml时最高；(3)卵丘细胞的凋亡率在100ng/mligf-1最低，仅为(6.32±0.84)%，其他处理组凋亡率均显著增加(p＜0.05)，对照组凋亡率最高，为(26.14±3.16)%。上述结果表明，igf-1可调节卵丘细胞的hsp70、bax和bcl-2表达，降低细胞凋亡率，其最佳作用浓度为100ng/ml。本研究为阐明igf-1抑制细胞凋亡的分子机制提供了新的依据，为进一步揭示igf-1在卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的作用机制提供理论依据，有助于牦牛胚胎体外发育技术改进。