番茄材料pi128216抗疮痂病t3小种基因rx4启动子的克隆与分析

？抗病基因的启动子在黄单胞杆菌属(xanthomonas)病原菌与寄主植物互作中起着重要的作用。番茄疮痂病是由黄单胞杆菌引起的一种严重威胁番茄生产的病害，已有研究表明，病原菌t3小种(x.perforans)与抗病基因rx4的识别可能与该基因的启动子有关。因此，本研究采用pcr技术从醋栗番茄(solanumpimpinellifolium)材料pi128216基因组dna中克隆了rx4上游2149bp的核苷酸序列。经与plantcis-actingregulatorydnaelements(place)数据库对比发现，该序列中含有启动子基本核心作用元件，赤霉素、脱落酸、乙烯等激素诱导相关的顺式作用元件，干旱、盐胁迫、高低温等非生物胁迫相关的顺式作用元件，大量与病原菌诱发因子表达调节相关的转录因子wrky和myb结合的元件，以及抗性元件w-box、g-box等。将该启动子4个不同长度的缺失片段分别与gus报告基因融合构成表达载体，利用农杆菌介导瞬时表达体系在番茄子叶与烟草(nicotianabenthamiana)叶片中进行表达。gus活性定量分析结果显示，仅有-338~-41之间297bp片段活性很弱，其余3个片段-552~-41之间511bp片段、-1285~-41之间1244bp片段和-1285~-552之间733bp片段的活性依次增强，但差异不明显。因此，-1285~-338之间的区域对rx4基因的启动子活性有重要作用。这一发现为进一步研究该启动子类型以及rx4与番茄疮痂病病原菌t3小种的互作提供了参考。