mir-223敲减慢病毒的构建

？目的构建mir-223敲减慢病毒，为进一步研究mir-223的功能提供工具。方法采用invitrogen公司mir-rnai在线设计工具，根据mir-223成熟体序列设计了一对互补寡核苷酸片段,退火产物连接至pcdna6.2-gw/emgfp-mir载体，经酶切连入pcdh-cmv-mcs-ef1-copgfp载体，构建了mir-223敲减慢病毒质粒，利用293t细胞将其包装成病毒，并感染st2细胞，观察感染效率并用qrt-pcr检测mir-223成熟体表达。结果酶切鉴定及测序结果显示成功构建了mir-223敲减慢病毒载体，mir-223敲减慢病毒包装并感染靶细胞，表达绿色gfp荧光蛋白的细胞约占细胞总数的80%~90%，病毒滴度为1×109pfu/ml，感染效率达90%。感染mir-223敲减慢病毒的细胞mir-223表达量（0.31±0.03）低于阴性对照（1.00±0.09），为阴性对照的31%，差异有统计学意义（n=3，t=15.091，p＜0.05）。结论成功构建了mir-223敲减慢病毒，为进一步研究？mir-223的功能准备了条件。