鸡piwi蛋白的亚细胞定位研究

？通过构建2种真核表达载体比较piwi蛋白在真核细胞中的表达部位，为进一步研究piwi蛋白的生物学功能提供依据。采用rt-pcr方法克隆了狼山鸡睾丸组织中piwi基因cds，构建含有增强型绿色荧光蛋白（egfp）报告基因的融合表达载体pegfp-c1-piwi，脂质体pei介导基因转染nih-3t3细胞，同时构建pcdna3.1-piwi真核表达载体，采用细胞间接免疫荧光方法检测piwi蛋白在nih-3t3细胞的表达部位。结果表明，成功克隆出公鸡piwi基因的全序列cds，大小为2604bp，与genbank中预计的序列基本一致；融合表达载体pegfp-c1-piwi在整个细胞中都有表达；而间接免疫荧光方法检测到pcdna3.1-piwi载体主要在nih-3t3细胞质中表达。piwi蛋白主要在细胞质中表达，采用间接免疫荧光方法比egfp报告基因法更为可靠，适合目的蛋白的亚细胞定位研究。