植酸酶转基因猪成纤维细胞系的构建

？本研究旨在获得对胃蛋白酶和胰蛋白酶具有耐受性的植酸酶转基因猪成纤维细胞系。本研究首先检测了转植酸酶基因的酵母发酵液分别经不同浓度、ph2.0的胃蛋白酶和不同浓度、ph7.0的胰蛋白酶处理后的酶活残余量；然后采用流式细胞术筛选了慢病毒转染的阳性猪成纤维细胞，并进行鉴定。结果表明，酵母粗酶液经胃蛋白酶和胰蛋白酶处理后，残留酶活分别保持在70%和80%以上；包装后的慢病毒滴度为3.75×107，经流式细胞术筛选的转基因细胞阳性率为1.2%，pcr和rt-pcr结果表明，植酸酶基因已整合到基因组上，且该基因在转录水平上表达。本研究为制备植酸酶转基因细胞系提供了一种快速有效的方法，为转基因猪的培育奠定了基础。