表达h3n2亚型猪流感病毒ha基因重组伪狂犬病病毒的构建

？将sv40启动子控制下的lacz基因表达盒和cmv启动子控制下的h3n2亚型猪流感病毒（sivh3n2）的ha基因插入到伪狂犬病病毒（prv）通用转移载体pbdtk-uni中，获得转移载体pltk-ha。将该载体与prvbartha-k61株基因组dna通过脂质体法共转染vero细胞，经过10代蓝斑筛选、纯化和pcr鉴定获得了一株插入sivha基因的重组伪狂犬病病毒，命名为rprv-ha。westernblotting和间接免疫荧光试验证实ha基因在重组病毒感染的细胞中获得了表达。用不同的细胞（pk-15、ibrs-2、vero和鸡胚成纤维细胞）对该重组病毒与亲本病毒的增殖滴度和致细胞病变进行比较，未见显著差异，对第30代重组病毒的ha基因进行序列分析，表明该重组病毒遗传性状稳定。