猪流行性腹泻病毒n蛋白的真核表达及其亚细胞定位的初步分析

？以构建的含有编码猪流行性腹泻病毒cv777株核衣壳蛋白(n)基因的阳性质粒pmdt-18-n为模板，用含有kpnⅰ和xhoⅰ酶切位点的上、下游引物扩增获得n基因，该pcr产物经kpnⅰ和xhoⅰ双酶切后定向克隆到经相同双酶切的真核表达载体pcdna3.1(+)中，经过酶切鉴定和测序鉴定，将构建的重组质粒命名为pcdna3.1(+)-n，且未发现碱基的缺失和插入。用脂质体法将pcdna3.1(+)-n转染veroe6细胞,在48h后,以针对猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白的鼠源`多抗血清进行westernblot、免疫荧光检测，并运用共聚焦显微镜分析n蛋白的亚细胞定位。结果表明n基因能在真核细胞veroe6中正确表达，共聚焦分析结果表明n蛋白在细胞质和细胞核中定位。