微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因cp21的原核表达及鉴定

？本研究旨在克隆微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因cp21开放阅读框，构建其原核表达质粒，并对获得的融合蛋白进行鉴定。从含cp21基因的噬菌体中提取模板dna，pcr扩增基因片段，构建pet-28a-cp21原核表达质粒，转化至埃希氏大肠杆菌bl21（de3）中，iptg诱导表达，表达产物经sdspage和westernblotting分析鉴定。用原核表达蛋白免疫小鼠，制备抗重组蛋白多抗，对蛋白进行定位。结果表明成功扩增出cp21基因，并构建原核表达质粒，转化至大肠杆菌中表达出相对分子质量为25ku的融合蛋白，westernblotting证明表达的cp21融合蛋白能与抗c.parvum多克隆抗体产生特异性反应。免疫荧光结果表明：cp21基因在子孢子和卵囊期均表达，且表达产物位于子孢子表膜和卵囊壁表面。cp21是一种与侵入机制有关的黏附相关蛋白。研究结果为微小隐孢子虫的免疫学诊断及疫苗研制奠定了基础。