山羊类es细胞的分离与培养

？旨在优化并建立有利于山羊类es细胞生长的饲养层细胞、培养基、细胞因子和传代方法。本研究选择武汉市本地白山羊配种6～7d后的胚胎，通过全胚培养法、酶消化与机械分离结合法分离山羊类es细胞，并在不同的细胞饲养层中饲养、在培养基中添加不同的生长因子、采用不同的传代方法，比较不同培养条件对山羊类es细胞生长和增殖的影响。通过碱性磷酸酶染色和免疫组化染色法鉴定es细胞特异生物标记akt、ssea-1和oct-4的表达，并将得到的山羊类es细胞进行体外分化。结果表明，与小鼠胎儿成纤维细胞（mouseembryonicfibroblast，mef）和山羊胎儿成纤维细胞（goatembryonicfibroblast，gef）相比，c2c12更有利于细胞的贴壁，但差异不显著（p>0.05）；细胞传代时，在高浓度细胞因子lif（leukemiainhibitoryfactor）和scf（stemcellfactor）中处理icm（innercellmass），更有利于细胞传代（传至第8代）；培养基中添加lif和scf的同时，添加肝素和胰岛素，更有利于细胞的传代（传至第9代）；山羊类es细胞中ssea-1（stage-specificembryonicantigens1）和oct4免疫组化染色呈阳性，在体外培养时可以分化为上皮样细胞、空泡样细胞和跳动的类心肌细胞。成功分离得到能自然分化成不同类型细胞的山羊类es细胞。