p21基因在牛卵成熟中的表达检测及其真核达载体构建

？本研究旨在检测p21基因在牛卵成熟过程中的表达，并构建其真核表达载体。首先利用rtpcr和免疫荧光染色对不同成熟阶段牛卵内p21的mrna和蛋白表达进行检测。然后从牛成纤维细胞中克隆了p21基因并构建pvenusp21真核表达载体。经脂质体2000介导重组质粒pvenusp21转染hela细胞，通过荧光显微镜观察、rtpcr检测，确认重组质粒在hela细胞内的表达及定位。最后应用体外转录试剂盒将p21venus体外转录为crna，并注射牛卵母细胞，荧光显微镜下观察其表达及定位。结果显示，在牛卵体外成熟过程中，各时期均存在p21基因mrna及蛋白的表达。构建的真核表达载体pvenusp21能够在hela细胞中正确表达及定位。p21venuscrna显微注射牛卵后其融合蛋白也能实现准确定位，为研究p21在卵母细胞成熟以及胚胎发育过程中的作用奠定了基础。