口蹄疫病毒vp2基因重组表达载体的构建及其稳定表达细胞系的建立

？本试验旨在构建asia1型口蹄疫病毒(fmdv)的vp2基因重组表达载体,并建立稳定表达vp2基因的bhk-21细胞系。利用rt-pcr方法扩增asia1型fmdv的cdna,获得vp2基因完整的编码区,构建可表达vp2的带有绿色荧光蛋白标记基因的pires2-egfp-vp2重组表达载体。经鉴定正确后,利用lipofectaminetm2000将重组质粒转染293t细胞,通过westernblot技术检测vp2蛋白的瞬时表达;然后再转染bhk-21细胞,通过g418筛选,形成单克隆细胞系,经荧光筛选到表达egfp的抗性单克隆细胞,扩繁培养克隆细胞,再通过west-ernblot技术检测其vp2的表达,最终筛选到稳定表达fmdvvp2基因的bhk-21细胞系。结果表明,vp2基因重组表达载体pires2-egfp-vp2构建正确,能够在293t细胞内瞬时表达;转染bhk-21细胞,经g418筛选到表达vp2基因的bhk-21细胞克隆,经长达60d的传代,获得了稳定表达vp2基因和egfp的bhk-21细胞系。上述结果表明,我们建立了稳定表达vp2基因的bhk-21细胞系,为进一步探讨vp2基因在fmdv诱导细胞凋亡中的作用奠定基础。