狮头鹅prl基因的克隆及原核表达

？为了进一步研究prl对狮头鹅繁殖性能的生理调节机制，采用rt-pcr方法从狮头鹅脑垂体组织扩增获得prl基因的cdna序列，克隆至pmd18-t载体获得重组质粒pmd18-prl，并进行序列测定和分析。将测序正确的cdna序列定向克隆到pet32a(+)，构建表达载体pet32a-prl，并转化至bl21(de3)大肠杆菌表达目的蛋白，经iptg诱导后进行sds-page检测和westernblot分析。狮头鹅prl基因编码区含有600个核苷酸，编码199个氨基酸（genbankno.gq856665），与其它禽类prl具有高度保守性；狮头鹅prl蛋白二级结构由多个α螺旋和β转角及无规卷曲构成，推测n端70~76、95~102、150~155和207~213区段为其抗原表位的优势区。sds-page检测表明狮头鹅prl基因在大肠杆菌中获得了高效表达，可溶性表达产物约占全菌总蛋白的53.6%，融合蛋白分子量约41ku，并用镍柱亲和层析法分离纯化融合蛋白。westernblot分析证实了所获的融合蛋白具有较强抗原性。试验结果为进一步研究prl基因的生物功能及其对狮头鹅就巢、产蛋等生产性状的影响奠定了基础。