神经肽y对猪小肠上皮细胞napi-ⅱb蛋白表达及无机磷吸收的影响

？本试验通过猪小肠上皮细胞（intestinalepithelialcells，iec）的体外培养，旨在从细胞水平、基因转录和蛋白表达3个层面探讨不同浓度神经肽y（neuropeptidey，npy）对猪iec中ⅱb型钠磷转运蛋白（sodiumdependentphosphatecotransporterⅱb，napi-ⅱb）的表达及无机磷（inorganicphosphorus，pi）吸收的影响，阐释npy调控pi吸收的机理，为深入研究动物小肠pi吸收的分子机制和调控通路提供试验依据。试验设有6个处理，对照组未加npy，其他处理组添加不同浓度的npy（10-11、10-10、10-9、10-8和10-7？mol？l-1），每个处理设有6~8个重复，通过噻唑蓝（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide，mtt）比色法检测小肠上皮细胞的增殖情况；通过磷检测试剂盒，采用磷钼酸法测定细胞上清液pi含量的变化；利用荧光定量pcr技术检测iec中napi-ⅱbmrna的相对表达量，采用蛋白质免疫印迹（westernblotting）技术检测napi-ⅱb蛋白的相对表达水平。结果表明：用不同浓度的npy刺激iec24h后，各处理组细胞增殖无显著性差异（p>0.05）。细胞上清液中pi含量随时间呈显著线性（p<0.01）和二次曲线（p<0.01）下降；在干预24h后，各处理组细胞上清液中pi含量组间呈现显著性差异（p<0.01），与对照组相比，10-10、10-9、10-8和10-7mol？l-1处理组上清液pi含量呈显著性下降（p<0.01），iec对pi的吸收量分别提高了161%、171%、168%和139%。npy添加浓度与napi-ⅱbmrna和napi-ⅱb蛋白的相对表达量均呈二次曲线关系（p<0.01，p<0.05）。适宜浓度的npy可以通过刺激小肠上皮细胞napi-ⅱbmrna的表达，使napi-ⅱb蛋白表达增多，进而诱导细胞外液中无机磷跨膜转运到细胞内液，促进小肠上皮细胞对无机磷的吸收；培养液中npy的最佳浓度为10-10~10-8？mol？l-1。