山羊不同组织及不同发育时期骨骼肌内参基因的表达稳定性分析

？为筛选出山羊不同组织、不同时期骨骼肌及骨骼肌卫星细胞(skeletalmusclesatellitecells，smscs)中稳定表达的内参基因，以出生后3日龄的山羊不同组织（心、肝、脾、肺、肾、大脑、大肠、小肠、背最长肌、臂三头肌和半膜肌）和不同时期（3、30、60、90和120d）的3种骨骼肌（背最长肌、臂三头肌和半膜肌）以及培养至不同阶段(1、3、4和7d)的山羊smscs为研究对象，运用qrt-pcr技术及genorm分析软件，探索9个内参基因（actin、gapdh、top2β、ywhaz、sdha、pgk1、rp2、rpl4和hprt1）mrna的表达稳定性。结果表明，在同一时期的11个组织中，内参基因表达稳定度的排序：hprt1>rp2>top2β>sdha>gapdh>actin>ywhaz>pgk1>rpl4，需要2个内参基因(hprt1和rp2)共同校正目的基因的表达；在不同发育时期的骨骼肌中，各内参的稳定度：ywhaz>actin>hprt1>rpl4>top2β>sdha>pgk1>gapdh>rp2，需引入3个内参(ywhaz、actin和hprt1)才能准确地校正定量结果；在smscs中各内参表达的稳定度排序：pgk1>sdha>actin>rpl4>gapdh>top2β>ywhaz>rp2>hprt1，需要3个合适的内参(pgk1、sdha和actin)作为标准化指标校正定量数据。本试验分别筛选出了能在山羊同一时期不同组织、不同发育时期的骨骼肌及smscs中稳定表达的内参基因及需要引入的内参数目，有利于更加准确地校正基因mrna水平的表达量，为更好地研究基因功能奠定了基础。