禽波纳病毒分离鉴定及其恒温扩增检测分析

？利用腺胃扩张症（pdd）患病鹦鹉腺胃rt-pcr阳性病料，接种猪睾丸（st）传代细胞，分离禽波纳病毒（abv），建立实时rt-lamp检测方法。将阳性病料接种st细胞单层传代，出现细胞圆缩、脱落，abv基质蛋白(m)基因扩增产物出现预计大小351bp条带，测序后进化树分析显示为abv5基因型。针对m基因设计id37、id30、id19、id6和id1共5组引物，后3组引物rt-lamp呈阳性反应。利用钙黄绿素建立实时rt-lamp，分别在36（id30）、38（id37）和49（id19）min出现扩增反应曲线，60min内扩增达到峰值。对各种临床样品检测与rt-pcr结果一致，新城疫等类症病毒未见阳性反应，显示较高的特异性；对细胞培养物检测10-1～10-5为阳性，比较rt-pcr敏感性提高约100倍。rt-lamp检测方法的建立为pdd防制提供新的检测方法，也是波纳病公共卫生研究有益的参考。