稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体细胞株的筛选与应用

？研制抗羊种布鲁菌脂多糖抗原的单克隆抗体，并应用其建立检测布病的双夹心elisa方法。本研究采用热酚水法提纯羊种布鲁菌(16m菌株)的脂多糖抗原，并经sdspage鉴定。用脂多糖和灭活的羊种布鲁菌16m作为免疫抗原，交替免疫6～8周龄balb/c雌鼠，第1次免疫用羊种布鲁菌标准菌16m全菌加等量弗氏完全佐剂；第2次免疫用脂多糖加等量弗氏不完全佐剂。将脂多糖作为包被抗原建立间接elisa方法，筛选针对抗羊种布鲁菌(16m菌株)脂多糖的单克隆抗体杂交瘤细胞株。筛选出3株能稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为5h3、6b8和3h7，细胞培养上清的elisa效价在1∶1000～1∶5000，小鼠腹水单克隆抗体elisa效价在1∶10000～1∶160000；抗体亚类鉴定表明：5h3、6b8属于igm亚类，3h7属于igg3亚类；特异性试验结果显示：3株杂交瘤细胞分泌的抗体不与大肠杆菌o157裂解抗原、鸡白痢沙门氏菌裂解抗原、鸭源鸡杆菌脂多糖抗原以及福氏志贺菌裂解抗原反应，仅与灭活的羊种布鲁菌(16m)发生反应。布鲁菌虎红平板凝集试验和试管凝集试验检测结果显示，获得的单抗可与标准检测抗原形成明显的颗粒凝集物和伞状凝集物。利用所建立的单克隆抗体细胞株，建立了一种检测布鲁菌的双夹心间接elisa方法,并进行了特异性和敏感性检测。对模拟样品和临床样品进行检测，准确性均很高。