小反刍兽疫病毒分离株china/tib/07辅助质粒及微型基因组的构建和鉴定

？本研究旨在构建小反刍兽疫病毒(pprv)的辅助质粒和微型基因组并验证其功能，为建立pprv反向遗传操作平台奠定基础。首先构建表达pprv分离株china/tib/07的n、p和l蛋白的辅助质粒pcin、pcip和pcil。通过间接免疫荧光试验验证3个辅助质粒转染细胞后的蛋白表达情况，并从mrna水平上验证蛋白表达的正确性；扩增pprv基因组两末端序列和egfp报告基因，三者通过overlappcr连接并克隆至转录载体poltv5中构建微型基因组。将构建的微型基因组分别与辅助病毒和3个辅助质粒进行共转染。经鉴定各辅助质粒完全正确，构建的微型基因组不论与辅助病毒还是与3个辅助质粒共转染，报告基因均表达。本试验成功构建了pprv分离株的表达n、p和l蛋白的3个辅助质粒以及微型基因组，并用微型基因组验证了3个辅助质粒可以作为pprv反向遗传操作的辅助质粒，为该病毒感染性克隆的构建奠定了基础。