不含POU结构域的八聚核苷酸结合蛋白（NONO）真核表达载体的构建及其细胞内定位

目的？构建小鼠的不包含POU结构域的八聚核苷酸结合蛋白（NONO）真核表达载体，并观察其在NIH3T3细胞中的？表达和定位。方法？？提取BALB/c小鼠肝脏组织总RNA，通过RT-PCR扩增得到NONO编码序列，将该序列克隆至带有血凝素？（HA）标记的载体pcDNA3-HA上，构建质粒pcDNA3-NONO-HA。通过PCR、双酶切鉴定构建正确后以脂质体为媒介转染NIH3T3？细胞，采用荧光显微镜观察该融合蛋白在细胞内的表达及定位情况。结果？？重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定证明构建正确，且能？在NIH3T3细胞中得到大量表达。荧光显微镜观察发现NONO-HA融合蛋白在静息状态下主要分布于胞质中。结论？？成功构建带？HA标签的NONO真核表达载体，该载体能在哺乳动物细胞中有效表达NONO-HA融合蛋白。？