特定微环境诱导人脐带沃顿胶间充质干细胞向汗腺样细胞分化的实验研究

［摘要］？目的？鉴定人脐带沃顿胶间充质干细胞（hUCWJ-MSCs）经汗腺诱导培养基培养后向汗腺样细胞分化的潜能。方法？酶消化法分离培养人正常汗腺细胞，热休克汗腺细胞后收集培养基上清液，按10%的体积分数配制汗腺分化诱导培养基。酶消化法分离获取hUCWJ-MSCs，流式细胞仪分析细胞表型特征;成骨诱导培养基和成脂诱导培养基中培养2～3周后采用碱性磷酸酶染色和油红-O染色对其分化潜能进行鉴定;在汗腺诱导培养基中培养3周，倒置显微镜观察细胞形态变化，分别收集培养1、2、3周时的细胞，采用免疫组织化学和流式细胞术检测汗腺标记物CEA、CK14、CK19的表达，RT-PCR检测汗腺发育基因（EDA）的表达。结果？正常汗腺细胞呈铺路石状克隆样增生。hUCWJ-MSCs呈梭形、成纤维细胞样，流式细胞分析显示其CD44、CD105、CD34、CEA阳性率分别为97.37%、96.26%、0.56%、0.52%;经成骨诱导培养基和成脂诱导培养基培养2～3周后，可诱导成为油红-O染色阳性的脂肪细胞和碱性磷酸酶染色阳性的骨细胞;在汗腺诱导培养基中培养3周后，细胞具有类似汗腺样结构，免疫组织化学DAB显色结果显示分化后的hUCWJ-MSCs表达汗腺细胞标记物CEA、CK14、CK19，流式细胞仪检测其阳性率分别为54.37%、60.25%、62.13%，RT-PCR结果显示其可较高水平地表达EDA基因。结论？hUCWJ-MSCs具有向汗腺样细胞分化的潜能。