副溶血弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

目的？建立一种快速检测副溶血弧菌的实时荧光定量PCR方法。方法？？根据副溶血弧菌tdh基因设计合成引物及？TaqMan探针，利用阳性质粒和模拟标本建立副溶血弧菌实时荧光定量PCR检测方法。结果？？以副溶血弧菌DNA为模板克隆了？tdh基因，得到阳性质粒。利用阳性质粒建立了定量PCR方法，得到标准曲线y=-4.9197x+58.72，决定系数（R2？？）为0.9864。此方？法具有很好的特异性，在对15种肠道致病菌的检测中，只有副溶血弧菌基因组DNA的扩增结果为阳性。对粪便和食物模拟标本进？行检测，敏感性均为10？？2？？cfu/μl。此方法重复性较好，对4种浓度（10？？？5？？、10？？？4？？、10？？？3？？、10？？？2？？cfu/μl）的菌液各进行3次检测，结果均为阳性，且Ct？值的变异系数<2%。结论？？建立了一种检测副溶血弧菌的荧光定量PCR方法，该法的敏感性和特异均较好，适用于快速、准确地检？测食品和粪便中的沙门菌。