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ISSN: 2333-9721
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HBV表型耐药方法的建立及临床分离株的表型耐药分析

, PP. 632-634

Keywords: 肝炎,乙型,慢性,拉米夫定,药物耐受性,突变

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Abstract:

目的?建立HBV表型耐药分析方法,体外培养慢性乙型肝炎患者血清HBV分离株并系统分析其对拉米夫定(LAM)?的敏感性。方法??从1例LAM耐药慢性乙型肝炎患者血清中提取HBVDNA,PCR扩增RT基因,克隆到pGEM-Teasy载体中,随?机挑选10个克隆进行DNA序列测定,并分析RT区LAM耐药相关的突变位点。用XhoI和NcoI双酶切pGEM-Teasy-RT及?pTriEx-HBV(C),构建1.1倍HBV野生株和LAM耐药突变株的重组载体pTriEx-wRT和pTriEx-mRT,转染人肝癌细胞系HepG2?细胞。转染60h后加入不同浓度(0、0.01、0.1、1、10、100μmol/L)的LAM,药物连续作用5d后,抽提病毒核心颗粒HBVDNA,通过实时荧光PCR及Southernblotting检测不同药物浓度作用下HBVDNA的复制水平。结果??成功建立体外HBV表型耐药分析方法。?野生未突变株重组载体pTriEx-wRT转染HepG2细胞后,随着LAM浓度的升高,HBVDNA水平明显下降,而突变株重组载体?pTriEx-mRT转染HepG2细胞后,HBVDNA水平无明显下降,IC?50?值与野生株相比增加了2500倍。结论??建立的HBV表型耐药分析方法对监测HBV耐药性具有可行性。??

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