大鼠胸主动脉血管内皮细胞的分离培养和纯化鉴定

目的？探索分离、培养大鼠胸主动脉血管内皮细胞的有效方法。方法？？取Wistar大鼠1只，无菌条件下打开胸腔取出？胸主动脉，去除外周结缔组织及脂肪，使主动脉内膜翻出，用丝线结扎动脉两端后用烧热的镊子烫烙。置于50ml铺有鼠尾胶培养瓶？中培养，加入含有20%新生牛血清的DMEM/F12培养液静止培养，6d后换液并弃主动脉。经0.125%胰酶差速消化传代，采用免疫？细胞化学法鉴定血管内皮细胞标志分子Ⅷ因子在细胞中的表达情况。结果？？培养6d时有少量细胞自主动脉迁移出并贴壁生长;？？？？12～14d时贴壁细胞覆盖大部分培养瓶底，约70%的细胞汇合成单层;经胰酶差速消化传代细胞生长旺盛，细胞汇合后呈现典型的？“鹅卵石”样内皮细胞特征;内皮细胞标志物Ⅷ因子表达阳性率达100%。结论？？本研究采用的方法简便易行，不需要胶原酶及内皮？细胞生长补充物，更为经济适用，适用于细小血管内皮细胞的分离与培养。