|
解放军医学杂志 2013
Apelin-13对5-Aza诱导脐带间充质干细胞向心肌细胞分化的影响, PP. 796-800 Keywords: 脐带,间质干细胞,心肌,细胞分化,apelin-13,5-氮胞苷 Abstract: 目的 探讨apelin-13蛋白在体外对5-氮胞苷(5-Aza)诱导人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)向心肌细胞分化的影响。方法 采用组织块贴壁法培养hUC-MSCs,胰酶消化传代;取P2代细胞置于不同分化条件的培养液中分化培养14d,实验分为A、B、C、D组(apelin-13浓度分别为0、1×10-6、2×10-6和10×10-6mol/L),各组培养基中5-Aza浓度均为10×10-6mol/L。采用流式细胞仪检测hUC-MSCs表面免疫标记,MTT法检测细胞在570nm处的吸光度(A)值,RTPCR检测肌钙蛋白T(cTnT)、GATA-4mRNA表达水平,免疫组织化学染色法检测心肌细胞表面标志物cTnT的表达。结果 流式细胞仪鉴定结果表明,hUC-MSCs表达CD44、CD90、CD105、CD73、经典人类白细胞抗原Ⅰ类抗原(HLAABC),不表达CD34、CD45、经典人类白细胞抗原Ⅱ类抗原(HLA-DR)。MTT检测显示,0、10×10-6mol/Lapelin-13处理的hUC-MSCs在570nm处的A值分别为0.841±0.290、0.875±0.325,差异无统计学意义(P>0.05)。B、C、D组cTnTmRNA表达水平分别是A组的2.09±1.35、5.24±1.30、1.17±0.63倍,B、C、D组GATA-4mRNA表达水平分别是A组的2.68±1.18、4.82±0.14、2.14±0.27倍;C组与B、D组比较,cTnT、GATA-4mRNA表达差异具有统计学意义(P<0.05)。免疫组化染色显示,诱导14d后C组细胞cTnT蛋白表达呈阳性。结论 10×10-6mol/Lapelin-13对hUC-MSCs无毒性作用,一定浓度的apelin-13蛋白可增强5-Aza诱导hUC-MSCs向心肌细胞分化的效率,浓度为2×10-6mol/L时增强作用最明显。
|