番茄脂氧合酶基因的表达和酶活性分析

将番茄脂氧合酶基因TomloxD克隆至酵母表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母GS115菌株,构建组成型表达TomloxD的酵母工程菌株。SDS-PAGE和Westernblot分析表明,经甲醇诱导,TomloxD蛋白在酵母中得到表达,表达的融合蛋白分子量约为103.56kD,与预测的分子量一致。酶活性分析表明,酵母中表达的TomloxD蛋白具有脂氧合酶活性。半定量RT-PCR分析表明,TomloxD基因在番茄中表达受机械损伤的诱导,损伤处理的番茄叶片中脂氧合酶的活性明显增高。说明TomloxD基因在番茄防御信号中发挥作用。