山羊传染性胸膜肺炎病原快速诊断方法的建立

为准确快速鉴定临床疑似山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)病原,针对丝状支原体山羊亚种(Mmc)与绵羊肺炎支原体(Mo)16SrRNA基因设计两对特异性引物Ps/Pa、Ms/Ma,通过优化反应条件及体系,建立检测CCPP两种主要致病支原体的双重PCR方法,并检测了所建方法特异性、敏感性及临床应用。当引物、Mg2+及dNTP浓度分别为0.8pmol/μL、1.5nmol/μL、0.2nmol/μL,Ps/Pa与Ms/Mo比例为11时,于54℃退火40s,可最小检出Mmc与Mo核酸量分别为0.1ng、0.01ng,敏感性良好。通过特异性与临床疑似病例检测,证明所建方法具较好特异性,可初步应用于临床诊断。