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OALib Journal期刊
ISSN: 2333-9721
费用：99美元
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正交设计优化广西火桐ISSR-PCR反应体系
, PP. 78-82
Keywords: 广西火桐,正交设计,优化
Abstract:
以广西火桐DNA为模板，利用正交试验分别对ISSR-PCR反应的MgCl2浓度、dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶浓度、模板DNA浓度进行了优化，并通过梯度PCR确定最佳退火温度和循环次数，最终确定广西火桐最佳反应体系及扩增条件。25μL体系中1×PCRbuffer，2.5mmol/LMgCl2,0.15mmol/LdNTPs，0.06U/μLTaqDNA聚合酶，3ng/μLDNA模板，0.2μmol/L引物；最佳扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性45s，52℃退火45s，72℃延伸1.5min，共30个循环；72℃最后延伸7min。扩增后的PCR产物在4℃保存。应用该ISSR体系对10个广西火桐样品进行了扩增，证实了该体系的适用性和稳定性。
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