干扰素β1a基因真核表达质粒的构建和表达

目的：构建干扰素β1a(IFN-β1a)的CHO表达体系，探讨人IFN-β1a在真核细胞中的表达效果。方法：采用全基因合成法获取重组人IFN-β1a基因，并通过点突变将IFN-β1a的17位半胱氨酸进行修饰，合成的基因经PCR扩增，连接入pSV2-dhfr质粒中，构建重组真核表达质粒pSV2-dhfr-IFN-β1a。将质粒转染至CHO-dhfr－细胞中，经MTX加压筛选，获得稳定生长的能够持续表达IFN-β1a的单克隆细胞株；提取细胞基因组DNA，进行PCR鉴定。收集细胞培养上清液，采用Wish细胞病变抑制法检测转染细胞中IFN-β1a的抗病毒活性。结果：重组真核表达质粒pSV2-dhfr-IFN-β1a经PCR及双酶切鉴定证明构建正确；以转染细胞基因组DNA为模板，可扩增出IFN-β1a基因；转染后重组细胞表达的IFN-β1a具有抗病毒活性，达到3×105IU·mL－1。结论：IFN-β1a基因真核表达质粒构建成功，并在CHO细胞中成功表达了具有较高生物学活性的IFN-β1a蛋白。