Apelin通过Akt/eNOS机制促进肺血管内皮细胞一氧化氮释放

目的探讨Apelin对肺血管内皮细胞释放一氧化氮（NO)的影响及其机制。方法培养新生鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）。(1)以1x105个/孔密度接种至24孔板，80%融合后，无血清培养24h。分为2组：Apelin组，加入Apelin至终浓度为10-8mol/L；对照组，加入等量无血清DMEM培养液。每组设立4个复孔。继续培养，并分别在0min、2min、5min、15min、30min时间点取培养液测NO浓度。(2)以5x105个/孔密度接种至6孔板，80%融合后，无血清培养24h分为3组：Apelin组，加入Apelin至终浓度为10-8mol/L。Apelin+Akt抑制剂（Aktinhibitor）组，加入Apelin前用5μmol/L浓度的Akt抑制剂预处理30min。对照组加入等量DMEM培液。每组设立3复孔。继续培养5min后立即提取总蛋白，用于Westernblot检测磷酸化Akt和磷酸化内皮型一氧化氮合酶（eNOS）蛋白表达。结果与0min时间点比较，培养液中NO浓度分别在2min、5min、15min时间点增加（PPPP