大麦醇溶蛋白基因片段克隆和RNAi植物表达载体构建

为了降低啤酒大麦蛋白的含量，提高啤酒大麦品质，利用甘肃推广面积最大的品种甘啤4号为材料，克隆大麦醇溶蛋白基因保守区序列，构建RNAi表达载体。根据已知大麦醇溶蛋白基因保守序列设计一对特异性引物B2PF5′-CAACCATTTCCACAGCAACCACCAT-3′，B2PR5′-GAAAGATAGAGTAGACGATTGCACG-3′，采用PCR技术从甘啤4号大麦基因组中获得了1个349bp片段（GP4）。依据载体pHANNIBAL和pART27的结构，分别将GP4按所对应酶切位点正反向插入，利用热激法转化。结果分析显示，克隆出的片段与GenBank（NCBI）中醇溶蛋白基因核苷酸序列同源性高达92%，所构建成的RNAi表达载体pART27-pHAN-GP4中含目标片段。