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毛？ISSR-PCR反应体系的建立
, PP. 114-119
Keywords: 毛？ ,ISSR ,单因素2次循环试验 ,体系优化 ,引物筛选
Abstract:
以毛？叶片为试材，通过单因素2次循环试验对毛？ISSR反应体系进行优化，建立了毛？ISSR-PCR的最佳反应体系和扩增程序。结果表明PCR反应体系总体积为25μL，其中10×Buffer2.5μL，模板DNA用量50ng，TaqDNA聚合酶用量1.5U，Mg2+浓度2.0mmol/L，引物浓度0.6μmol/L，dNTPs浓度0.15mmol/L；扩增程序94℃预变性5min；94℃变性50s，48.8～？59.1℃退火60s，72℃延伸1.5min，38个循环；最后72℃延伸10min。在此基础上，从100条ISSR通用引物中筛选出17条多态性好、稳定性高的引物，并优化了它们的退火温度。这一优化体系的建立，为开展毛？种质资源鉴定、遗传多样性及分子育种方面的研究提供了技术依据和参考。
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